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Himedia維生素B12測(cè)定培養(yǎng)基
更新時(shí)間:2024-05-15
品名:Himedia維生素B12測(cè)定培養(yǎng)基
英文:Vitamin B12 Assay Medium
貨號(hào):M036
品牌:HiMedia
用途:維生素B12的微生物法測(cè)定
原理                                  
乳酸桿菌生長(zhǎng)需要特別的營(yíng)養(yǎng),因而在非選擇性培養(yǎng)基上很難生長(zhǎng)。維生素測(cè)定用培養(yǎng)基用于維生素的微生物法測(cè)定。該方法需要三種培養(yǎng)基:即維持培養(yǎng)基,用于保持菌種活

品名:Himedia維生素B12測(cè)定培養(yǎng)基

英文:Vitamin B12 Assay Medium

貨號(hào):M036

品牌:HiMedia

用途:維生素B12的微生物法測(cè)定

原理                                  

乳酸桿菌生長(zhǎng)需要特別的營(yíng)養(yǎng),因而在非選擇性培養(yǎng)基上很難生長(zhǎng)。維生素測(cè)定用培養(yǎng)基用于維生素的微生物法測(cè)定。該方法需要三種培養(yǎng)基:即維持培養(yǎng)基,用于保持菌種活力;接種培養(yǎng)基,用于測(cè)試菌液的制備;測(cè)定用培養(yǎng)基,用于待測(cè)維生素的定量。

HiMedia維生素B12測(cè)定培養(yǎng)基,不含維生素B12,但包含所有其他維生素和必要養(yǎng)分,用于萊士曼乳酸桿菌(ATCC 7830)的生長(zhǎng)。萊士曼乳酸桿菌(ATCC7830)作為測(cè)定用菌,最早由Capp等人描述(1)并被美國(guó)藥典和美國(guó)分析化學(xué)家協(xié)會(huì)(AOAC)所推薦(2,3)。

用已知稀釋度的維生素B12標(biāo)準(zhǔn)品,可以制備標(biāo)準(zhǔn)曲線(2,3)。

測(cè)試菌液的制備是將將活化后的菌株接種到乳酸桿菌肉湯培養(yǎng)基中,推薦在37°C 孵育24 小時(shí),再離心、清洗、重懸于10 ml 生理鹽水中,再通過(guò)濁度分析或酸度分析,確定生長(zhǎng)反應(yīng)。用維生素B12的濃度及對(duì)應(yīng)的吸光度制作標(biāo)準(zhǔn)曲線。用標(biāo)準(zhǔn)曲線可確定待測(cè)樣本中的維生素B12的濃度。

應(yīng)非常小心地避免培養(yǎng)基和玻璃器具的污染。應(yīng)使用潔凈的無(wú)去污劑的玻璃器具。少量的外源物質(zhì)的污染可能導(dǎo)致錯(cuò)誤的結(jié)果。用于接種的測(cè)定菌應(yīng)在專用的培養(yǎng)基中培養(yǎng)。

 

應(yīng)用                                     

HiMedia維生素B12測(cè)定培養(yǎng)基推薦采用萊士曼氏乳酸桿菌(ATCC 7830)作為測(cè)定用菌,進(jìn)行維生素B12的微生物法測(cè)定。


質(zhì)量控制                             

?   外觀——奶油色至黃色,具均勻性,傾向形成可容易分解成粉末狀的軟塊

?   制備好的培養(yǎng)基顏色和透明度——淡琥珀色透明溶液,可能有輕微沉淀

?   配比濃度——在25°C下8.5%w/v(8.5g/100ml水)水溶液,pH值為6.1±0.2

?   pH值——5.90-6.30

 

配置                                

稱取8.45g干粉培養(yǎng)基溶于100ml蒸餾水,必要時(shí)加熱使培養(yǎng)基溶解。混勻,使輕微的沉淀均勻分布。測(cè)定時(shí),分裝試管,每管為5ml培養(yǎng)基(包含標(biāo)準(zhǔn)品和待測(cè)樣品)。加蒸餾水,使總體積達(dá)到10ml。高壓消毒15磅121°C 5分鐘。立即冷卻培養(yǎng)基。每個(gè)試管(10 ml)的維生素B12水平為0、0.025、0.05、0.075、0.1、0.125、0.15、0.2 ng時(shí),均可獲得滿意結(jié)果。

培養(yǎng)反應(yīng)                            

進(jìn)行微生物法測(cè)定維生素B12。采用萊士曼氏乳酸桿菌(ATCC7830),35-37°C孵育18-24小時(shí)。

生長(zhǎng)狀況                            

隨著測(cè)定管標(biāo)準(zhǔn)品水平升高,(美國(guó)藥典維生素B12標(biāo)準(zhǔn)水平,0,0.025,0.050,0.075,0.1,0.125,0.150,0.2ng),目標(biāo)菌生長(zhǎng)逐漸遞增,伴隨著620nm處吸光度的增加。


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